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【qPCR】熒光定量PCR的熔解曲線,你了解多少?
發(fā)布時(shí)間:2025-04-15
熔解曲線探針?lè)ㄊ且环N利用特異性探針結(jié)合到目標(biāo)DNA序列上的技術(shù),通過(guò)監(jiān)測(cè)探針與目標(biāo)DNA結(jié)合狀態(tài)的溫度依賴(lài)性變化,來(lái)識(shí)別和定量特定的DNA或RNA序列。這種方法的關(guān)鍵在于探針與目標(biāo)序列匹配時(shí),其熔解溫度(Tm值)較高;而存在單核苷酸多態(tài)性(SNPs)或其他變異時(shí),Tm值會(huì)下降。通...
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2022
1-21
雙槽梯度PCR儀應(yīng)該這樣使用
雙槽梯度PCR儀的反應(yīng)原理類(lèi)似于DNA的天然復(fù)制過(guò)程,其特異性依賴(lài)于與靶序列兩端互補(bǔ)的寡核苷酸引物。PCR由變性一退火(復(fù)性)--延伸三個(gè)基本反應(yīng)步驟構(gòu)成:①模板DNA的變性:模板DNA經(jīng)加熱至94℃左右一定時(shí)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)間后,使模板DN...
2022
1-17
熒光定量基因擴(kuò)增儀使用必須遵守下面的基本安全措施
熒光定量基因擴(kuò)增儀在操作、維護(hù)和修理本儀器的所有階段,都必須遵守下面的基本安全措施。如果不遵守這些措施或本說(shuō)明書(shū)其它地方指出的警告,便可能影響到儀器提供的保護(hù)。同時(shí),這也會(huì)破壞設(shè)計(jì)和制造的安全標(biāo)準(zhǔn)以及儀器的預(yù)期使用范圍。a)儀器接地為了避免...
2022
1-11
熒光定量PCR的理論依據(jù)是什么?
熒光定量PCR在反應(yīng)中,引入了一種熒光化學(xué)物質(zhì),隨著PCR反應(yīng)的進(jìn)行,PCR反應(yīng)產(chǎn)物不斷累計(jì),熒光信號(hào)強(qiáng)度也等比例增加。每經(jīng)過(guò)一個(gè)循環(huán),收集一個(gè)熒光強(qiáng)度信號(hào),這樣就可以通過(guò)熒光強(qiáng)度變化監(jiān)測(cè)產(chǎn)物量的變化。從而得到一條熒光擴(kuò)增曲線。熒光擴(kuò)增曲線...
2022
1-4
二維梯度PCR的應(yīng)用領(lǐng)域有哪些?
PCR技術(shù)從發(fā)明至今已有二十多年的時(shí)間,用于PCR實(shí)驗(yàn)的儀器不斷的推陳出新。然而PCR的基本過(guò)程沒(méi)有太大變化,包括變性-退火-延伸這三步。這其中包括反應(yīng)條件、使用試劑的量甚至是引物等,很多研究者在進(jìn)行PCR優(yōu)化時(shí)都會(huì)考慮退火溫度的優(yōu)化,這時(shí)...
2021
12-27
實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀保養(yǎng)及維護(hù)方法
高分辨率溶解(HRM)作為一種聯(lián)管式的PCR后分析技術(shù),引起了學(xué)術(shù)界的廣泛關(guān)注。HRM基于DNA雙鏈的溶解特性對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行分析,與傳統(tǒng)的溶解曲線分析類(lèi)似,但提高更多的信息,因而具有更廣泛的應(yīng)用??筛鶕?jù)PCR產(chǎn)物的序列、長(zhǎng)度、GC含量或鏈...
2021
12-18
雙槽二維梯度PCR儀該如何設(shè)置合適的退火溫度?
雙槽二維梯度PCR儀就是將多個(gè)的PCR反應(yīng)放在一起做,不用一次一次的作很多次,溫度梯度PCR可以很快的找出適合的退火溫度,或者說(shuō)可以在適合的退火溫度下擴(kuò)增出目的條帶。除具標(biāo)準(zhǔn)PCR儀功能外,其梯度模塊還能同時(shí)進(jìn)行多達(dá)12個(gè)不同退火溫度的PC...
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